Cervical cytology, HPV DNA and mRNA - a comparative study in 162 patients / Citologia cervicovaginal, DNA HPV e RNAm - estudo comparativo em 162 pacientes

In contrast to the general improvement of the socioeconomic status of the Brazilian population, pathologies that are characteristic of poor health assistance persist. Among those, cervical cancer (CC) is emblematic; it still presents a persistently high incidence. Objective: to compare the performance of cervical cytology to HPV DNA and mRNA detection methods in 162 patients undergoing routine gynecological clinical practice. Methods:a total of 162 patients attended during routine gynecological examination in a private clinic in Florianópolis, Santa Catarina, Brazil, had cervical samplescollected and processed for cytopathological and molecular tests, conventional PCR and NASBA. Positive samples positive for HPV DNA were submittedto Type-Specific PCR (TS-HPV PCR). Patients with altered smears were submitted to colposcopy and biopsy. Results: among the 162 samples, 19.8%(32/162) had altered smears, being 4/32 classified as ASC-H, 9/32 as ASC-US, 9/32 as LSIL and 10/32 as HSIL. Biopsies revealed nine cases of CIN I,nine CIN II and one CIN III, while seven were negative for cervical neoplasia. Overall, HPV DNA was detected in 38.3% (62/162) of the samples and HPV E6/E7 mRNA expression was found in 13.6% (22/162). Using TS-HPV PCR, HPV 16 was the most frequent type, found in 8% of the samples (5/62).Considering CIN2+ the gold-standard, cytology had 38.5% of specificity. Sensitivity and specificity of HPV-DNA PCR and NASBA were, respectively,100% and 60%; 18.7% and 68.7%. Conclusion: mRNA E6/E7 expression was not a highly specific or sensitive marker for prevalent cervical disease while HPV DNA may be used for cervical cancer screening only in conjunction to more specific adjuvant tests.

Em contraste com a melhora geral da situação socioeconômica da população brasileira, patologias que são características de uma deficiente assistência à saúde persistem. Entre elas, o câncer cervical (CC) é emblemático, ainda apresentando uma persistente alta incidência. Objetivo: avaliaro desempenho da citologia e de métodos de detecção de DNA e RNAm de HPV em 162 pacientes submetidas a prática clínica ginecológica de rotina.Métodos: cento e sessenta e duas pacientes atendidas em uma clínica particular de Florianópolis, Santa Catarina, Brasil, tiveram amostras cervicais coletadas e processadas para estudo citopatológico e molecular; PCR convencional e NASBA. Amostras positivas para o DNA do HPV foram submetidas àPCR tipo-específica (PCR HPV-TE). Resultados: entre as 162 amostras, 19,8% (32/162) apresentaram esfregaços alterados, sendo 4/32 classificadas comoASC-H, 9/32 como ASC-US, 9/32 como LSIL e 10/32 como HSIL. Biópsias revelaram nove casos de NIC I, nove casos de NIC II e um caso de NIC III. ODNA do HPV foi detectado em 38,3% (62/162) das amostras. Expressão de E6/E7 (RNAm) foi encontrada em 13,6% (22/162) das amostras. Utilizando a PCR tipo-específica (HPV-TE), o HPV 16 foi o tipo mais frequente, encontrado em 8% (5/62) das amostras HPV+. Considerando NIC 2+ o padrão-ouro,a especificidade da citologia foi de apenas 38,5%, enquanto a sensibilidade e a especificidade da PCR DNA e RNAm foram, respectivamente, 100% e 60%;18,7% e 68,7%. Conclusão: a expressão de E6/E7 RNAm não se mostrou um marcador altamente específico ou sensível para doença cervical prevalente,enquanto o DNA HPV pode ser utilizado para rastreamento apenas em conjunto com testes adjuvantes mais específicos.

Assessment of fibrosis and vascularization of bone marrow stroma of chronic myeloid Leukemia patients treated with imatinib mesylate and their relationship with the cytogenetic response / Avaliação da fibrose e vascularização do estroma da medula óssea de pacientes com leucemia mielóide crônica tratados com mesilato de imatinibe e sua relação com a resposta citogenética

Chronic Myeloid Leukemia (CML) is a myeloproliferative disease characterized by the presence of the Philadelphia chromosome (translocation between chromosomes 9 and 22), resulting in the formation of the hybrid BCR-ABL protein. Currently, the treatment of CML patients is performed with imatinib mesylate (IM), which promotes the elimination of leukemic cells by inhibiting the kinase activity of BCR-ABL. This study evaluated the effectiveness of IM by monitoring 22 CML patients in a chronic phase treated at the CEPON/SC with IM for a minimum follow-up period of two years. Cytogenetic Response (CR) and bone marrow biopsies (BMB) were evaluated before and after IM treatment. BMB were evaluated by detection of reticulin degree and vascularization. The results were correlated to the CR. Mean time to achieve CR was 9 months and was attained by 77.27 percent of the patients. The results from the initial BMB analysis showed that 59.09 percent presented reticulin of between 2+ and 4+ whereas after treatment, only 27.17 percent presented this degree. With regard to vascularization of the initial sample, 90.91 percent were graded between II and IV, whereas after treatment, 40.91 percent had this degree. The results suggest a positive correlation of degree of reticulin and vascularization with CR.

A Leucemia Mielóide Crônica (LMC) é uma doença mieloproliferativa caracterizada pela presença do cromossomo Filadélfia (translocação entre os cromossomos 9 e 22), que resulta na formação da proteína híbrida BCR-ABL. Atualmente o tratamento de pacientes com LMC é realizado com mesilato de imatinibe (MI), o qual promove a eliminação das células leucêmicas pela inibição da atividade quinase de BCR-ABL. O presente estudo avaliou a eficácia do MI por meio do acompanhamento de pacientes portadores de LMC em fase crônica, atendidos no CEPON/SC tratados com MI pelo tempo mínimo de dois anos. Foram avaliadas a Resposta Citogenética (RC) e as biópsias de medula óssea (BMO) antes e após o tratamento com MI. As BMO foram avaliadas quanto ao grau de reticulina e vascularização. Os resultados correlacionaram-se com a RC cujo tempo médio para obtenção da RC foi de 9 meses, sendo atingida por 77.27 por cento dos pacientes. Na primeira BMO, 59.09 por cento dos pacientes apresentaram grau de reticulina entre 2+ e 4+ e após o tratamento, apenas 27.17 por cento apresentaram esta graduação. Quanto à vascularização da primeira amostra, 90.91 por cento foram graduadas entre II e IV e após o tratamento, 40.91 por cento apresentaram esta graduação. Os resultados sugerem uma correlação diretamente proporcional entre os graus de reticulina e vascularização com a RC.

In vitro effect of the herbicide glyphosate on human blood platelet aggregation and coagulation / Efeito in vitro do herbicida glifosato na agregação plaquetária e coagulação sanguínea em humanos

Glyphosate [N-(phosphonomethyl)-glycine] is a broad-spectrum, non-selective, post-emergence herbicide that is extensively used in agriculture. Published data referring to the effects of this product on human health are contradictory. We showed previously that long-term treatment of rats with low doses of Glyphosate-Biocarb® may induce hepatic histological changes and bleeding without decreasing platelet counts. The aim of the current study was to investigate, in vitro, the effect of glyphosate on human blood platelet aggregation and coagulation. Materials and methods: Platelet aggregation was determined in the platelet-rich plasma using the agents: 6µM-adenosine diphosphate, 6µM-epinephrine and 4µg/mL-collagen. Pretreatment with 500µg/mL glyphosate showed significant hypofunction of the three aggregating agents. The inhibitory effect was dose-dependent at concentrations from 50 to 500 µg/mL. The release of ATP was lower for glyphosate-treated platelets after stimulation by collagen. On the other hand, glyphosate did not promote any inhibitory effects on prothrombin time, thromboplastin time and thrombin time. In conclusion, the results demonstrate that glyphosate promotes changes in the platelet metabolism with an inhibitory effect on primary hemostasis.

O glifosato [N-(phosphonomethyl)-glycine] é um herbicida pós-emergente não seletivo de amplo espectro muito utilizado na agricultura. Dados da literatura referentes aos efeitos desse produto na saúde humana são contraditórios. Em estudos prévios demonstramos que ratos previamente tratados com glifosato apresentavam lesões hepáticas e sangramento sem alterações quantitativas de plaquetas. O objetivo do presente estudo é investigar os efeitos in vitro do glifosato (GP) na agregação plaquetária e coagulação sanguínea em humanos. A agregação plaquetária foi determinada em plasma rico em plaquetas (PRP) usando os agentes adenosina difosfato (ADP) 6µM, epinefrina 6µM e colágeno 4µg/mL. Pré-tratamento com GP 500µg/mL demonstrou significativa hipofunção dos três agentes agregantes. O efeito inibitório foi dose dependente em concentrações de 50-500 µg/mL. Utilizando-se a quantificação de ATP como um índice da capacidade de secreção plaquetária, foi observado diminuição da liberação das plaquetas tratadas com GP. Por outro lado, o GP não promoveu efeito inibidor no tempo de protrombina (TP), tempo de tromboplastina parcial ativada (ATTP) e tempo de trombina (TT). Em conclusão, os resultados demonstram que o GP promove mudanças no metabolismo plaquetário com efeito inibitório na hemostasia primária.

Morfometria e quantificação de estruturas nucleares por meio de análise computadorizada de imagens para diagnóstico de malignidade / Morfometric and quantification of nuclear structures through computerized analysis of images for malignidad diagnosis

Nos estudos de carcinomas cervicais uterinos, pode-se utilizar além das técnicas citológicas convencionis para sua classifcação, métodos hitoquímicos na identificação da atividade celular. Um destes métodos é a técnica de AfNOR que consiste na coloração das regiões organizadoras de nucléolo (NOR) pelo nitrato de prata, a qual evidencia a atividade proliferativa das neoplasias mostrando uma tendência progressiva ou regressiva das lesões. O problema dos métodos citilógicos é a subjetividade inerente das avaliações microscópicas. Com a evolução da informática foi possível captar imagens microscópicas, no entanto, para avalições mais precisas é necessário análise morfométrica das estruturas celulares. Objetivo: Desenvolver um programa para morfometria e quantificação dos pontos de NOR's em células escamosas da cérvice uterina coradas pela prata para diagnótico de malignidade. Métodos e resultados: Foram captadas 2500 imagens provenientes de amostras de raspado cervical de pacientes com suspeita de lesão e coradas pelo método de AgNOR. O programa foi idealizado a partir do sistema Scion Image e desenvolvido para determinar o númro e área dos pontos NOR's em imagens digitais, estabelecendo exatamente o número e a área ocupada em cada núcleo celular analisado, demonstrando claramente uma correlação positiva para o grau de agressividade das lesões cervicais. Finalmente, esta assocação da informática com técnicas citológicas poderá se tornar uma ferramenta valiosa para os casos de difícil conclusão pelos métodos de classificação citológica convencionais.

Possíveis discrepâncias dos achdos colposcópicos, citológicos, histológicos e moleculares: relato de um caso de pequena lesão cervical / Possible discrepancies of findings colposcopic, cytology, hisology and molecular: story of a case of small cervical injury

O objetivo deste trabalho foi avaliar as discrepâncias observadas nos exames colposcópicos, citológicos e histológicos em um caso de micro-lesão cervical. Este é um estudo de acompanhamento de uma paciente com lesão cervical uterina. Os autores revisaram o prontuário médico da paciente quanto aos dados clínicos e exames colposcópicos de colo uterino, exame citológico de raspado cervical uterino, exame histológico cervical uterino e biologia molecular HPV de raspado cervical. Durante o acompanhamento da paciente estudo encontramos discrepâncias na tríade colposcopia-citologia-histologia em várias etapas da evolução do quadro. O diagnóstico final da paciente depois de oito avaliações durante 1 ano e meio foi de Lesão intra-epitelial escamosa de alto grau e neoplasia intra-epitelial cervical, nos exames citológicos e histológicos respectivamente, e foi encaminhada para conização. É um caso de micro-lesão cervical, onde a coleta mesmo orientada pela colposcopia, não foi satisfatória em algumas etapas do diagnóstico, dificultando o exame histológico. A utilização da tríplice diagnóstica colposcopia-citologia-histologia bem como teste de biologia molecular durante todo acompanhamento da paciente forneceu abordagem segura aos procedimentos terapêuticos, evitando desta forma a progressão para o câncer cervical uterino invasivo.

Determinação do número de regiões organizadoras de nucléolo (AgNOR) em lesões do epitelo cervical uterino / Determination of number of nucleolar organizers regions in lesions of the uterine cervical epithelium

A técnica de AgNOR é um método histoquímico que evidencia as Regiões organizadoras de nucléolo (NORs), sendo considerado um bom marcador de proliferação celular e consequentemente pode ser usado para avaliar malignidade. O Câncer de colo uterino pode ser detectado através do exame preventivo do câncer, através do Método de Papanicolaou, possibilitando o tratamento precose. Os casos sugestivos bem como os inconclusivos devem ser confirmados pela histologia e/ou colposcopia, o que pode acarretar evasão das pacientes dos Serviços de Saúde. Os testes moleculares, quando apresentam resultados positivos para vírus oncogênicos, não determinam necessariamente o desenvolvimento de uma displasia, sendo necessário outros fatores. O objetivo deste trabalho foi avaliar a técnica de AgNOR aplicada em esfregaços de material cervical uterino e analisar a sua associação com o diagnóstico citológico e histológico em lesões do epitélio cervical uterino. Foram estudadas 85 pacientes na faixa etária de 18 a 65 anos de idade. Amostras citológicas de material cervical foram submetidas à coloração de AgNOR e Papanicolaou e abiópsia à coloração de HE. As laminas coradas com AgNOR e o diagnóstico citológico e histológico com correlação positiva para número dos pontos de AgNOR (r de Spearman: 0,8468 e 0,8441 respectivamente). Portanto conclui-se que a Técnica de AgNOR é eficiente, e que pode ser empregada em material cervical citológico nos casos inclusivos.

Thrombospondin in protein malnutrition induced hypoplasia

OBJETIVO: O objetivo do presente estudo foi verificar a concentração de trombospondina da matriz extracelular da medula óssea em camundongos após indução de hipoplasia por desnutrição protéica. MÉTODOS: Camundongos machos Swiss foram submetidos à desnutrição protéica com uma dieta contendo 4,0% de caseína até que perdessem 20,0% do peso original, enquanto o grupo-controle foi mantido com uma dieta contendo 14,0% de caseína por 15 dias. A medula óssea dos dois grupos foi então aspirada e extraída com tampão fosfato. A matriz extracelular foi analisada por SDS-PAGE 7,5% e a concentração de trombospondina foi quantificada por Enhanced Chemiluminescence Light Western blotting, com luminescência química avançada. RESULTADOS: A quantidade de trombospondina foi 30% superior nas amostras obtidas de animais desnutridos em relação às amostras do grupo-controle. CONCLUSÃO: Este estudo sugere que a concentração de trombospondina está aumentada na hipoplasia induzida por desnutrição protéica, provavelmente por alterar o microambiente da medula óssea.

Efeito da desnutriçäo protéica sobre a matriz extracelular da medula óssea de camundongos / Effect of the protein malnutrition on the extracellular matrix of the bone marrow of mices

As células sangüíneas originam-se da medula óssea através da célula tronco que sofre processo de proliferação, diferenciação e maturação no microambiente hematopoiético. O microambiente hematopoiético é uma estrutura altamente organizada composta de células estromais, moléculas da matriz extracelular (MEC) e citocinas. A desnutrição protéico-energética diminui a produção de células sangüíneas e interfere na defesa do organismo. Neste trabalho estudamos os efeitos da desnutrição protéica (dieta contendo 4 por cento de caseína) sobre a MEC da medula óssea em camundongos. Avaliamos a composição da MEC através de SDS-PAGE 7,5 por cento e Western blot para fibronectina (FN), laminina (LN) e trombospondina (TSP)...

Some hematimetric findings in human Giardia lamblia infection

Ate este momento poucos relatos de alteracoes hematologicas causadas pela Giardia lamblia tem sido descritos. Procuramos entao avaliar alguns pacientes infectados exclusivamente por G. lamblia (n=55), provenientes do Hospital Universitario, comparando-os com pacientes, pareados por sexo e idade, sem nenhum parasitismo (n=55), Foram avaliados: volume corpuscular medio (VCM), niveis de hemoglobina e contagem absoluta e relativa de eosinofilos e linfocitos. Nao foram observadas diferencas significativas entre os valores medios de VCM, niveis de hemoglubina e contagem absoluta e relativa de linfocitos para os dois grupos estudados...

Valores de referencia em hematimetria eritrocitaria em criancas e adolescentes / Erithrocitary hematimetric reference values in children and teenagers

Os valores eritrocitarios sao indicadores do estado de saude individual e populacional, portanto os valores de referencia sao de fundamental importancia. Breve revisao demonstra os diversos criterios utilizados para enquadrar um individuo como saudavel ou adequadamente nutrido. Os grupamentos etarios sao divergentes, contudo e claramente visivel as variacoes fisiologicas. Ressalta-se a importancia dos interferentes regionais. Os valores de referencia em hematimetria eritrocitaria utilizados no Brasil em criancas e adolescentes geralmente sao de outros paises, pela carencia de estudos em populacao brasileira.